離心式去垢劑去除柱
|
貨號(hào)
|
名稱(chēng)
|
規(guī)格
|
|
DD0550
|
離心式去垢劑去除柱（處理25-100 μl蛋白樣品）
|
10套
|
● 產(chǎn)品組成：
|
貨號(hào)
|
名稱(chēng)
|
規(guī)格
|
|
DD0550-01
|
0.5 ml去垢劑去除柱（含套管）
|
10套
|
|
DD0550-02
|
2 ml尖底離心管
|
10個(gè)
|
● 產(chǎn)品介紹：
離心式去垢劑去除柱能夠通過(guò)離心快速去除蛋白溶液或質(zhì)譜分析中肽段溶液中的常用去垢劑，包括離子型去垢劑，非離子去垢劑和兩性離子去垢劑。在蛋白實(shí)驗(yàn)中，去垢劑在促進(jìn)蛋白溶解，增加蛋白穩(wěn)定性以及阻止蛋白聚集方面都有重要作用。然而，蛋白溶液中的去垢劑會(huì)對(duì)下游實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生影響，如ELISA，等電聚焦以及質(zhì)譜分析等。在質(zhì)譜分析中，去垢劑會(huì)與肽段形成加合離子抑制肽段離子化，導(dǎo)致m/z值的遷移。因此，質(zhì)譜分析中去除肽段溶液中多余的去垢劑是影響分析結(jié)果的重要因素。該去除柱可以高效（＞95%）去除樣品中各種常用的去垢劑（濃度范圍1-5%）。
去垢劑去除柱參數(shù)如下：
|
柱體積
|
填料溶脹后體積
|
處理樣品體積
|
推薦起始樣品濃度
|
去除效率
|
|
0.5
ml
|
~0.6
ml
|
25-100
μl
|
＞0.5 μg/μl
|
~95%
|
● 貯存、運(yùn)輸和效期：
4℃貯存（不能冷凍）；常溫運(yùn)輸；有效期1年。
● 操作步驟
一、 去垢劑去除柱預(yù)處理：
1.1 取出柱子，放入套管中。
1.2 旋開(kāi)管蓋，不要擰掉柱子底部堵頭，加入0.4
ml 1×PBS，蓋緊管蓋，常溫靜置2
min，活化填料。
1.3 擰掉柱子底部堵頭，將柱子放入套管中，1000 g 離心1
min，棄流穿液。
注：離心力不要高于1000
g，過(guò)高的離心力會(huì)損傷填料，降低去垢劑去除效率。
1.4在柱子管蓋上標(biāo)記填料在柱子內(nèi)的傾斜方向，隨后離心步驟均按同一傾斜方向在離心機(jī)內(nèi)放置柱子。
1.5柱子中加入0.4
ml 1×PBS，1000
g 離心1min，棄流穿液。至此，柱子活化結(jié)束，備用。
二、樣品去垢劑去除：
2.1 將柱子轉(zhuǎn)移到2
ml尖底離心管中，加入25-100
μl待處理樣品（樣品濃度高于0.5
μg/μl），常溫靜置2
min。
2.2 1000g 離心2
min，收集離心管內(nèi)樣品。
● 注意事項(xiàng)：
1. 去垢劑去除效果：可以高效的（＞95%）去除樣品中各種常用的去垢劑（濃度范圍1-5%）。
|
去垢劑去除效率和蛋白回收效率
|
|
去垢劑
|
濃度
|
去除效率
|
BSA回收效率
（上樣量100 μg）
|
|
SDS
|
2.5%
|
99%
|
95%
|
|
脫氧膽酸鈉
|
5%
|
99%
|
99%
|
|
CHAPS
|
3%
|
99%
|
90%
|
|
Triton
X-100
|
2%
|
99%
|
87%
|
|
NP-40
|
1%
|
95%
|
91%
|
|
Brij-35
|
1%
|
99%
|
97%
|
|
Tween-20
|
0.25%
|
99%
|
87%
|
|
Octyl
glucoside
|
5%
|
99%
|
90%
|
2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi)，該去除柱最多處理體積是100
μl樣品，過(guò)多會(huì)導(dǎo)致收集
管中液體浸沒(méi)到去除柱。
3.
當(dāng)樣品濃度過(guò)低時(shí)（<0.5
μg/μl)，需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。
● 常見(jiàn)問(wèn)題：
|
常見(jiàn)問(wèn)題
|
可能原因
|
解決方法
|
|
蛋白回收率偏低
|
蛋白濃度過(guò)低（<0.5 μg/μl)
|
對(duì)蛋白液進(jìn)行適當(dāng)濃縮
|
|
樣品不能流穿
|
未扭掉柱子底部的堵頭
|
按照步驟1.3扭掉堵頭
|
● 實(shí)驗(yàn)示例：